e-magazine - page 40

Food Focus Thailand
AUGUST 2013 40
การเพาะเลี้ยงเชื้อ Campylobacter spp. บริสุทธิ์
แบงออกเปน 2 ขั้นตอน คือ
1. การเพาะเลี้ยงในอาหารเลี้ ยงเชื้อชนิดเหลว (Pre-enrichment)
เปนขั้ นตอนการเพาะเชื้ อเพื่อเพิ่มจำนวนเชื้ อในอาหารเลี้ ยงเชื้ อ
ชนิดเหลว โดยเชื้อ Campylobacter spp. ที่เก็บแช แข็งไวในหลอดสต็อกเชื้อ
(Stock culture) จะถูกนำมาเพาะเลี้ ยงในอาหารเหลว Brain heart
infusion โดยใชลูปฆ าเชื้อ (Sterile loop) เขี่ ยเชื้อจากหลอดสต็อกเชื้ อ
ใสลงในอาหารเหลว Brain heart infusion แกวงเบาๆ ป ดฝาพร อม
คลายเกลี ยวไวหลวมๆ แล วนำหลอดทั้ งหมดใส ในภาชนะเลี้ยงเชื้ อ
ในสภาวะไรออกซิเจน (Anaerobic jar) ที่ ใส Gas pack สำหรั บ
เพาะเชื้อ Campylobacter sp. ป ดฝาใหสนิ ทแลวนำไปบ มที่อุณหภูมิ 42°C
เปนเวลา 48 ชั่วโมง
2. การเพาะเลี้ยงเชื้ อบนเพลทอาหารเลี้ยงเชื้ อชนิดแข็ง
วิ ธีการนี้เป นการนำเชื้อที่บมได แลวจากหลอดอาหารเหลว Brain
heart infusion ในขั้นตอนที่ 1 มา Streak ลงบน Blood agar base
ที่ผสม Leaked horse blood รอยละ 5 นำเพลทที่ Streak แลวทั้งหมด
ใสลงในภาชนะเลี้ยงเชื้อในสภาวะไร ออกซิเจนที่ใส Gas pack เรียบร อย
แลว ปดฝาใหสนิ ทแลวนำไปบมที่อุ ณหภูมิ 42°C เปนเวลา 48 ชั่ วโมง
หลังจากนั้ นสังเกตและบั นทึ กลั กษณะเฉพาะของโคโลนี ของเชื้ อ
Campylobacter spp. ซึ่งจะมีขนาดเล็กประมาณ 1.5 มิ ลลิเมตร มีสีเทา
เยิ้ม และมี ความมั นวาว (รูปที่ 1) เมื่ อนำโคโลนี ที่ไดไปยอมแกรม
(Gram stain) และสองดูดวยกล องจุ ลทรรศน เพื่ อเปนการยืนยันวาเชื้ อ
ที่เพาะเลี้ยงไดคือเชื้อ Campylobacter spp. จริง โดยลักษณะเฉพาะของเชื้อ
Campylobacter spp. ติดสีแกรมลบ (Gram negative) และมีรูปรางเปน
ทอนโคงหรือเป นเกลียว (รู ปที่ 2)
รูปที่ 2. แสดงลั กษณะรูปรางของเชื้ อ Campylobacter spp. หลั งจากยอมแกรม
แลวสองดู ดวยกลองจุลทรรศน เชื้อ Campylobacter spp.
เปนแบคที เรียชนิดแกรมลบ เนื่องจากยอมติดสีแดงและมีรูปร าง
เปนท อน โคง หรือบิดเปนเกลียว
Figure 2 The special feature of Campylobacter spp. is gram negative
bacteria which has the bacilli, curve or spiral shape.
รูปที่ 1. แสดงลั กษณะโคโลนีของเชื้อ Campylobacter spp. บนอาหารเลี้ยงเชื้อ
Blood agar base ที่ผสม Leaked horse blood รอยละ 5
Figure 1 The appearance of the colony of Campylobacter spp. on blood
agar base with 5% leaked horse blood
The majority of them are children of the age 1-4 year old. As for in the
developing countries, including Thailand, the rate of sickness is 100
times higher than in the developed countries, and the rate of sickness
among tourists is at 2-3 percent per year. Among all diarrhea patients,
5 percent is caused by Campylobacter spp., and by Salmonella spp.
2-3 percent. In addition, there is interesting study of diarrhea in the
developed countries is more severe than in the developing countries,
as 50 percent of all patients have intestinal hemorrhage, compared
to 30 percent of such symptom found in Thailand. As for the study
on the contamination of Campylobacter spp. in meat products, the
contamination rate in chicken is 50-90 percent in the U.S. In Thailand
during the year 2000-2003, the study in the Northern provinces
showed that the contamination rate in chicken was 47 percent, and
33 percent in pork. Moreover, the contamination was found among
chicken and pig growing in the farms at the rate 64 percent and 61
percent, respectively. Presently, many researchers have conducted
and developed the assay methods for microbial agents to give the
result more quickly in order to control and eliminate the pathogen for
safety of consumers.
Campylobacter spp. is the Gram-negative bacteria which has the
bacilli, curve or spiral shape. They can move by the use of flagella.
The culture of Campylobacter spp. requires the low oxygen condition,
around 3-6 percent, for their growth.
The Pure Culture Technique of Campylobacter spp.
is divided into two steps, which are
1. Pre-enrichment Broth Culture
It is themethod of multiplyingmicroorganism in the pre-enrichment
broth by recovering the stock cultures of Campylobacter spp. in
Brain heart infusion broth. The experimenter would use the cooled
sterile loop to inoculate Campylobacter spp. from stock cultures into
Brain heart infusion broth. They may
slightly shake and do not fitting close.
Incubate the culture in an anaerobic
jar with gas pack under 42 OC for 48
hours.